亚洲天堂色图偷拍,欧美日韩免费看大片一二三区,韩国论理电影免费观看,亚洲国产成人久久一区二区三区

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 《mRNA-LNP疫苗的結(jié)構(gòu)與穩(wěn)定性》文獻(xiàn)解讀系列六

《mRNA-LNP疫苗的結(jié)構(gòu)與穩(wěn)定性》文獻(xiàn)解讀系列六

更新時(shí)間:2021-09-06   點(diǎn)擊次數(shù):1750次

LNP穩(wěn)定性


除了mRNA 的完整性外,LNP 的穩(wěn)定性對(duì)于 mRNA-LNP 疫苗的質(zhì)量也至關(guān)重要。目前的mRNA疫苗沒有披露關(guān)于LNP 穩(wěn)定性測(cè)試的數(shù)據(jù),但 Onpattro (patisaran) 的siRNA-LNP 制劑保存在2~8°C 之間時(shí)具有三年的有效期,同時(shí)該產(chǎn)品不能冷凍保存。


Onpattro 的LNP 系統(tǒng)的組成是:可電離的陽離子脂質(zhì)DLin-MC3-DMA、DSPC、膽固醇、PEG2000-C-DMG(見表 1)(摩爾比 50:10:38.5:1.5),它們?cè)诮M成上類似于 Comirnaty 和 mRNA-1273的LNP。在一項(xiàng)siRNA-LNPs 的研究中用類脂質(zhì)306O 13代替DLin-MC3-DMA,樣品水溶液在 2°C 、pH 7 的環(huán)境下下能穩(wěn)定儲(chǔ)存156 天,其粒徑和siRNA包封率沒有明顯變化。Suzuki 等人的補(bǔ)充研究表明 siRNA-LNP 能在 4°C 環(huán)境下穩(wěn)定儲(chǔ)存1.5。總之,這些數(shù)據(jù)都表明是mRNA 的不穩(wěn)定,而不是 LNP 的不穩(wěn)定,導(dǎo)致了當(dāng)前mRNA-LNP疫苗的儲(chǔ)存條件嚴(yán)苛和保質(zhì)期短。


Fan等人總結(jié)了脂質(zhì)體和 LNP的穩(wěn)定性及其質(zhì)量屬性。LNP 可以承受化學(xué)和物理不穩(wěn)定性,化學(xué)不穩(wěn)定性包括 LNP 中易水解和氧化的脂質(zhì)的降解。脂質(zhì)氧化可能發(fā)生在不飽和脂肪酸部分(Comirnaty 和 mRNA-1273 不存在該問題)和膽固醇,氧化可能是PEG2000 -DMG中PEG基團(tuán)存在雜質(zhì)導(dǎo)致的結(jié)果。除此之外,氧化性雜質(zhì)也可能導(dǎo)致包封的mRNA 氧化。脂質(zhì)例如 DSPC 和可電離的陽離子脂質(zhì)中的羧酸酯鍵容易受溫度和pH依賴性的水解的影響(圖 6)。


LNP 穩(wěn)定性的另一個(gè)關(guān)鍵因素是物理穩(wěn)定性,主要有三種類型的物理不穩(wěn)定性:包封的藥物的聚集、融合和泄漏。 LNP 在儲(chǔ)存和流通過程中容易發(fā)生 LNP 的聚集,所以為了增加穩(wěn)定性,LNP 中通常添加PEG化脂質(zhì),LNP微粒表面的PEG 分子可防止LNP 聚集。


另一種類型的物理不穩(wěn)定性主要由于mRNA 的泄漏,這主要影響包封產(chǎn)品的穩(wěn)定性。值得注意的是,包封率通常 > 90%,并且尚未報(bào)道過在儲(chǔ)存期間出現(xiàn)mRNA泄露(用RiboGreen監(jiān)測(cè))的情況。未包封的mRNA(“裸露的mRNA")幾乎不會(huì)被細(xì)胞攝??;而且它會(huì)迅速被降解,因此無法用于翻譯。

翻譯.png


圖6 用于 mRNA-LNP疫苗BNT162b2 (Comirnaty) 和 mRNA-1273的脂質(zhì)。


由于注射 mRNA-LNP疫苗時(shí)的超敏反應(yīng)可能與PEG化脂質(zhì)有關(guān),因此,已經(jīng)研究了防止聚集體形成的替代脂質(zhì)。使用多聚肌氨酸修飾脂質(zhì)能使脂質(zhì)遞送系統(tǒng)更加穩(wěn)定,在防止LNP聚集的同時(shí)能夠減少超敏反應(yīng)。但是目前仍然需要更多的實(shí)驗(yàn)來確定這種 PEG化脂質(zhì)替代品是否能真正的提高 mRNA 的穩(wěn)定性(例如不含過氧化物,注:目前使用的PEG脂質(zhì)由于工藝原因,會(huì)有一定的過氧化物雜質(zhì),這會(huì)引起LNP中其他含有不飽和鍵的脂質(zhì)和mRNA的氧化降解)。


分析 LNP 穩(wěn)定性


Fan 等人在前面提到的文章中對(duì)監(jiān)測(cè) LNP 穩(wěn)定性的分析方法進(jìn)行了專業(yè)評(píng)估。我們推薦感興趣的讀者可以查看相關(guān)文獻(xiàn)。


mRNA-LNP中哪個(gè)成分更不穩(wěn)定?


迄今為止,已有幾項(xiàng)研究考察了在儲(chǔ)存期間穩(wěn)定 mRNA 和穩(wěn)定 LNP 的方法。然而,兩者之中哪一個(gè)才是mRNA-LNP穩(wěn)定性的瓶頸?當(dāng)mRNA-LNP 制劑未冷凍時(shí),是mRNA 降解?還是 LNP 降解導(dǎo)致穩(wěn)定性問題?還是 mRNA 與 LNP 的組合?


與mRNA-LNP 系統(tǒng)相比,包封化學(xué)修飾且高度穩(wěn)定的siRNA 分子(例如 Onpattro)的LNP系統(tǒng)具有更長(zhǎng)的有效期。這表明當(dāng)前的穩(wěn)定性瓶頸不是 LNP,而是 mRNA。


迄今為止,公開資料還沒有披露關(guān)于 mRNA-LNP 制劑中 mRNA 和 LNP 完整性的研究報(bào)告。在研究存儲(chǔ)效果的少數(shù)研究中,例如 Zhang等人的研究,并沒有考察長(zhǎng)期儲(chǔ)存的穩(wěn)定性。因此,我們將首先研究裸露的mRNA的長(zhǎng)期穩(wěn)定性,但需要注意的是,這可能與包封在 LNP中的 mRNA 的穩(wěn)定性有所不同(見下文)。


在Pascolo等人的綜述中,裸露的mRNA的水溶液在無RNase的情況下只能在4°C下儲(chǔ)存幾天。這似乎符合目前對(duì) mRNA 不穩(wěn)定性的看法。目前關(guān)于裸露的mRNA長(zhǎng)期穩(wěn)定性的研究表明,mRNA 需要冷凍或干燥才能保持更長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定。


Roesler等人2009年的研究表明,編碼熒光素酶的mRNA 在無RNA酶存在的條件下,分別以液體或凍干形式在室溫下儲(chǔ)存,表達(dá)效率分別在第8天和第16天開始出現(xiàn)降低,凍干輔料和凍干工藝方面未經(jīng)優(yōu)化(見圖 7)。同時(shí)本研究無法得出關(guān)于2-8℃溫度下長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性的結(jié)論,因?yàn)榉€(wěn)定性研究只考察了32 天。


Wayment-Steele等人經(jīng)過基于理論降解速率計(jì)算,預(yù)測(cè) 長(zhǎng)度為4000 nt的mRNA在 pH 7.4 和5 °C 的條件下,存儲(chǔ)的半衰期為 941 天。他們注意到較長(zhǎng)的mRNA序列,例如SAM,更容易發(fā)生水解。由于這是jin基于水解降解動(dòng)力學(xué)的理論計(jì)算結(jié)果,可能會(huì)低估 了mRNA的實(shí)際降解速率,例如,當(dāng)存在痕量RNase時(shí),必須對(duì) mRNA 的穩(wěn)定性進(jìn)行更多研究才能知道m(xù)RNA實(shí)際存儲(chǔ)的穩(wěn)定性情況。

微信圖片_20210906095556.png

圖7 通過轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)效率分析mRNA在水中的穩(wěn)定性


這些研究表明,在水溶液中 mRNA 可能不如 LNP 穩(wěn)定。然而,應(yīng)該重申的是,這兩種成分的穩(wěn)定性考察結(jié)果可能與LNP包封mRNA 的情況不同。如前幾節(jié)所述,mRNA 與可電離的陽離子脂質(zhì)、膽固醇和水一起位于 LNP 核內(nèi)部(參見圖 4)。這意味著 mRNA 處于水性環(huán)境中,因此容易發(fā)生水解,其水解的機(jī)制可能與溶液中 mRNA水解 的機(jī)制相似。然而,另一方面,LNP 內(nèi)的 mRNA 可能通過疏水、氫鍵和/或靜電相互作用被可電離的脂質(zhì)包裹。在這種情況下,mRNA 可能比溶解在水溶液中的裸露的mRNA更穩(wěn)定。在沒有進(jìn)一步研究的情況下,只能得出結(jié)論,mRNA 的不穩(wěn)定性導(dǎo)致了儲(chǔ)存條件苛刻。 


儲(chǔ)存條件不同的原因


當(dāng)前 mRNA 疫苗的另一個(gè)有趣方面是,不同廠家疫苗報(bào)告的儲(chǔ)存溫度和相應(yīng)的“有效期"差異很大:從 -80°C 到 2-8°C,從幾天到幾個(gè)月。是否因?yàn)閙RNA 疫苗處的不同導(dǎo)致這種儲(chǔ)存條件的差異?又或者,儲(chǔ)存條件的差異是否與熱穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果相關(guān)或更可靠的方法有關(guān)?這些信息很重要,因?yàn)樯钊肓私鈱?duì)穩(wěn)定性產(chǎn)生積極影響的因素可能是未來設(shè)計(jì)熱穩(wěn)定mRNA 疫苗的關(guān)鍵突破點(diǎn)。


Acuitas Therapeutics的執(zhí)行官Tom  Madden 曾經(jīng)在采訪中表示,Moderna 和 Pfizer/BioNTech mRNA 疫苗可能具有相同的穩(wěn)定性。后者是否有可能使用更保守的方法來確保穩(wěn)定性?盡管如此,目前必須在 -60 至 -80 °C 之間儲(chǔ)存的Pfizer/BioNTech mRNA-LNP 疫苗很可能也在更高的溫度和冷藏條件下進(jìn)行了穩(wěn)定性考察,正如CureVac 科學(xué)家所做的那樣。


此外,穩(wěn)定性測(cè)試中的分析技術(shù)在靈敏度上可能不同,驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)也可能不同。疫苗穩(wěn)定性研究報(bào)告的發(fā)布可能對(duì)這些疑問作出回答,對(duì)此進(jìn)行比較研究會(huì)是很有趣的工作。




艾偉拓(上海)醫(yī)藥科技有限公司

艾偉拓(上海)醫(yī)藥科技有限公司

地址:上海市浦東新區(qū)張楊路838號(hào)27樓A座

© 2024 版權(quán)所有:艾偉拓(上海)醫(yī)藥科技有限公司  備案號(hào):滬ICP備19003552號(hào)-3  總訪問量:240478  站點(diǎn)地圖  技術(shù)支持:制藥網(wǎng)  管理登陸

最新国产精品精品视频 视频| 日本边添边摸边做边爱小视频| 57PAO成人国产永久免费视频| 极品人妻少妇一区二区三区| 男人午夜天堂av| 国产午夜精品福利久久| 中文字幕久精品免费视频| 国精品无码人妻一区二区三区| 园内精品自拍视频在线播放| 亚洲AV无码一区二区三区天堂网| 欧美韩日一级大片| 久久综合国产精品视屏| 中文字幕一区日韩在线视频| 国产一区二区三区无码| 婷婷五月日韩AV永久免费| 日啪人妻中文字幕| 欧美日韩中文国产一区二区三区| 少妇高潮喷水惨叫久久久| 欧美日韩中文在线字幕视频| 欧美日韩综合在线| 人妻洗澡被强公日日澡| 国产98在线 | 传媒| 视频在线观看一区二区三区| 97久久超碰福利国产精品…| 欧美精品一国产成人综合久久| 日韩精品人妻AV一区二区三区| 亚洲国产模特在线播放| 免费无码成人AV在线播| 亚洲综合精品一区二区三区中文| 最近中文字幕MV在线高清| 久久狠狠婷婷丁香香蕉| 亚洲精品无码久久久久去Q| 免费看av在线网站网址| 国产成人精品精品日本亚洲| 亚洲AV久播在线播放| 久久不见久久见免费影院| 精品综合久久久久久98| 久久久无码精品亚洲日韩蜜臀浪潮| 少妇系列中文字幕| 亚洲精品7777| 天天爽天天爽夜夜爽毛片,|